Unidad de Microscopía

Presentación

El servicio de microscopia de la UCIM pone a disposición de los investigadores una amplia variedad de microscopios ópticos que cubren la mayoría de las técnicas empleadas en investigación biomédica. Desde técnicas básicas como microscopia de campo claro o luz reflejada hasta las más avanzadas como microscopia de fluorescencia confocal, FRET, sondas de calcio, observación de célula viva, etc.

El objetivo del servicio es dar un soporte integral a los investigadores y hacer posible la incorporación de la microscopia a sus proyectos, asesorando y dando respuesta a cualquier duda puedan tener en este campo. Desde la preparación de las muestras hasta el análisis de imagen.

Procedimiento

La modalidad preferente de uso de los equipos es la de autoservicio, una vez recibida la formación necesaria. Alternativamente, se da la posibilidad de sesiones asistidas por los técnicos de la sección.
La reserva de los equipos se realizará mediante la aplicación web de la sección.
Para darse de alta en la aplicación de reservas se ha de solicitar por medio de un correo electrónico a la dirección microscopia.ucim@uv.es según las normas generales de uso vigentes.

Servicios

• Asesoramiento en la preparación de experimentos para microscopía confocal, procesado, obtención y presentación de resultado.
• Detección mediante sondas fluorescentes de procesos tisulares, celulares y subcelulares.
• Estudios de colocalización de marcadores.
• Análisis de materiales.
• Monitorización de moléculas.
• Captación de las imágenes, posterior procesado y análisis de las mismas.
• Captación de secuencias seriadas y posterior reconstrucción tridimensional.
• FRET (transferencia de energía por resonancia de fluorescencia).

Equipamiento

– Microscopio confocal SP8
El microscopio confocal nos permite visualizar muestras con distintos marcajes fluorescentes obteniendo imágenes de gran nitidez y calidad debido a que la imagen obtenida no está contaminada por la luz emitida fuera del plano focal. Gracias a esta característica de confocalidad, nos permite realizar reconstrucciones tridimensionales a partir de secciones ópticas.

– Microscopio de campo claro
El microscopio de campo claro nos permite visualizar muestras teñidas o con pigmentos naturales que resultan altamente contrastadas. La fuente de iluminación es la luz blanca. Los componentes de la muestra se visualizan gracias a las diferencias de contraste que existen entre ellos y el medio que los rodea.

– Microscopio invertido DMi8 para célula viva – sondas de calcio
La variedad de proteínas fluorescentes y sondas multicolor que se han desarrollado, permiten marcar prácticamente cualquier molécula. La capacidad de visualizar dinámicas proteicas en vesículas, orgánulos, células y tejidos ha proporcionado nueva información sobre el funcionamiento de las células tanto en situaciones de salud como de enfermedad. Esta información incluye la dinámica espacio-temporal de procesos, como la mitosis; estudios en la dinámica de iones, como el Ca+₂ y los cambios en el citoesqueleto.

– Microscopio invertido de fluorescencia
La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados en microscopía biológica y analítica, sobre todo por su alto grado de sensibilidad y especificidad. La microscopía de fluorescencia permite a los usuarios determinar la distribución de una sola molécula, su cantidad y su ubicación dentro de una célula.
Los microscopios de fluorescencia que se emplean en aplicaciones de investigación se basan en una serie de filtros ópticos. Los filtros suelen estar insertados en un bloque de filtros. Mientras que el filtro de excitación selecciona las longitudes de onda que excitan un fluoróforo concreto dentro de la muestra, el filtro de emisión actúa como una especie de control de calidad, ya que solo permite pasar las longitudes de onda de interés emitidas por el fluoróforo.

– Preparación de muestras: criostato, microtomo y sistema de inclusión de parafina
El criostato, también conocido como criotomo, es un microtomo de congelación que se utiliza para cortar rebanadas de material congelado, se encuentra en el interior de una cámara fría.
El microtomo se utiliza para realizar cortes histológicos de distinto grosor, es un instrumento de precisión con el que se obtienen series ininterrumpidas de cortes de un grosor determinado y uniforme.
El sistema de inclusión de parafina es una perfusión de la misma en los tejidos para crear un medio homogéneo, que permita la realización de cortes de poco grosor con gran facilidad y una precisión.

Tutoriales y Recursos

Microscopio Confocal Leica SP8
Microscopio invertido DMi8 per célula viva
Microsocpio invertido de fluorescencia Leica DMI 3000-B

Microscopio DMi8
Configuzación básica del software LAS-X por adquisición de imágenes

LAS-X de Leica:
Programa que, con su versión gratuita, permiten la visualización, exportación y edición de imágenes en formato Leica.

Fiji:
Distribución de IamgeJ2 con gran calidad de “plugins” instalados para facilitar el análisis de imagen.

Ilastik:
Programa que utiliza algoritmos de aprendizaje automático para segmentar, clasificar, seguir y contar fácilmente células y otros datos experimentales.

Cellprofiler:
Programa que permite el análisis de una gran cantidad de imágenes fácilmente. Ideal para el análisis de algo contenido.

QuPath:
Programa que se utiliza a menudo para aplicaciones de patología digital porque ofrece un potente conjunto de herramientas para trabajar con imágenes de portaobjetos completos