Unidad de Citometría de flujo y Cultivos celulares

Presentación

La sección de cultivos celulares y Citometría de flujo de la Unidad Central de Investigación de Medicina (UCIM), es un laboratorio destinado al desarrollo de un conjunto de técnicas que permiten la catalogación, mantenimiento y estudio de células “in vitro” así como la criopreservación de líneas celulares. La sección comprende 3 áreas de trabajo:

• Cultivos celulares
• Citometría de flujo
• Criopreservación

La citometría de flujo es una técnica que permite medir y obtener información sobre las características ópticas de células o partículas en suspensión al ser sometidas a una fuente de luz láser.

Esta medida se realiza sobre cada partícula individual en base la dispersión de la luz frontal (forward scatter), relacionada con el tamaño celular, la dispersión lateral 90 grados (side scatter), relacionada con la estructura interna y con la complejidad citoplasmática y a la emisión de fluorescencia de las partículas iluminadas por la luz láser.

La citometría de flujo nos permite estudiar las características fenotípicas de las poblaciones celulares, inmunofenotipo, utilizando anticuerpos monoclonales fluorescentes y las características funcionales utilizando para ello las diferentes sondas fluorescentes disponibles.
La citometría de flujo es un sistema rápido, pudiendo analizar miles de células / minuto, y multiparamétrico, permitiendo el análisis de diversos parámetros celulares simultáneamente.

La sección tiene como objetivo dar asesoramiento científico y técnico a diferentes usuarios tanto internos como externos, para ello se dispone de diferentes citómetros de flujo analizadores, separadores y un sistema de citómetro de imagen, microscopios, cabinas de flujo, incubadores de CO2 en distintos porcentajes de O2 y una sala para la criopreservación de las muestras.

Procedimiento

El usuario ha de contactar con el servicio por vía telefónica o por correo electrónico, para ser informado de los presupuestos y las instalaciones.

Un vez aceptado el presupuestos, el usuario llevará sus muestras en recipientes herméticos que impidan la contaminación del personal y del medio ambiente en caso de derramamiento.

En caso de solicitar análisis de muestras por citometría de flujo contactar con los responsables para ser informados de los protocolos de tinción de las muestras.

Si el usuario trabaja con líneas celulares de nuestro banco de muestras en estado de crioconservación, ha de seguir los diferentes protocolos de expansión y descongelación.

Servicios

• Análisis de la calidad del cultivo celular (evaluación de micoplasma, tratamiento del cultivo celular).
• Estudios de viabilidad celular y proliferación.
• Evaluación de la citotoxicidad in vitro (determinación IC₅₀).
• Mantenimiento de líneas celulares en cultivo primario.
• Cultivo en diferentes porcentajes de O₂.
• Catalogación, almacenamiento y crioconservación de los diferentes tipos de líneas celulares.
• Asesoramiento en la preparación de protocolos citométricos. Diseño de paneles multicolor. Procesamiento de las muestras.
• Inmunofenotipado de poblaciones sanguíneas humanas.
• Inmunofenotipado de poblaciones sanguíneas de diferentes especies animales, ratón, rata, cerdo, conejo.
• Estudio de poblaciones celulares en muestras de biopsias.
• Estudio de procesos fisiológicos a nivel celular. Ciclo celular, Apoptosis, Marcadores mitocondriales, Niveles de Ca++, Estudio del daño al ADN, Estrés oxidativo.
• Estudio de niveles de citoquinas intracelulares.
• Separación celular en muestras de cultivos celulares, así como en muestras de pacientes. Separación de células transfectadas con vectores fluorescentes. Separación de poblaciones leucocitarias de interés.
• Análisis de los datos citométricos generados en el servicio con software específico.
• Curso básico de citometría a usuarios.

Equipos

• Balanza analítica y de precisión monoplato
• Baño maria analógico
• Bioimpresora 3D
• Cabina de alta seguridad microbiológica
• Cabina de flujo laminar de seguridad biológica tipo IIA
• Cabina de flujo laminar
• Centrífuga refrigerada con rotores – Eppendorf
• Centrífuga refrigerada con rotores – Heraeus
• Citómetro de flujo analizador – BD FACSVERSE
• Citómetro de flujo analizador – BD LSR Fortessa X-20
• Citómetro de flujo separador-BD FACS AriaIII
• Citómetro de imagen en flujo Amnis ImageStream. Luminex
• Citómetro físico W8. Separador de esferoides y organoides. Cell Dynamics
• Sistema de separación magnética. Miltenyi
• Centrífuga refrigerada con rotores – Gyrozen
• Contador automático de células
• Espectrofluorímetro
• Espectrofotómetro de bajos volúmenes
• Espectrofotómetro
• Incubador 5% CO₂ 21%O2 – Heracell 150i
• Incubador 5% CO₂ 21%O2 – SANYO MCO18AIC
• Incubador 5% CO₂ 21%O2 – SANYO MCO19AIC
• Incubador 5% CO₂ 21%O2 para organoides
• Incubador 5% CO2 y 21%O2 – Thermo Fischer FORMA STERICYCLE
• Incubador hipoxia 5% CO2 0-21% O2 – Thermo Fischer FORMA STERICYCLE i160
• Microcentrífuga refrigerada
• Microscopio invertido
• Tanque de N2
• Termociclador
• Ultra Centrífuga